益气补肾化瘀方治疗早期糖尿病肾病临床观察

目的 观察益气补肾化瘀方治疗早期糖尿病肾病的临床疗效。方法 将64例早期糖尿病肾病患者分为对照组和治疗组，每组32例。对照组服用缬沙坦，治疗组服用缬沙坦和益气补肾化瘀方，疗程均为12周。比较两组治疗前后中医证候积分、血糖、血压、尿白蛋白排泄率（urinary albumin excretion rate，UAER）、24h尿蛋白定量(24-hour urine protein, 24hUP)、尿白蛋白与尿肌酐比值（urine albumin to creatinine ratio，UACR）变化情况。结果 治疗组临床疗效优于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。与治疗前比较，治疗组治疗后中医证候积分显著下降(P＜0.05)，治疗组治疗后中医证候积分降低值显著大于对照组(P＜0.05)。与治疗前比较，两组患者治疗后空腹血糖（fasting plasma glucose，FPG）、收缩压、UAER、24hUP、UACR均显著降低(P＜0.05），治疗组治疗后FPG、UAER、24hUP、UACR降低值显著大于对照组(P＜0.05）。结论 益气补肾化瘀方可提高早期糖尿病肾病患者的临床疗效，减少尿蛋白。     

300例冠心病合并2型糖尿病患者中医证型与血脂、血糖和心脏超声结果的关系

目的 探究冠心病合并2型糖尿病患者中医证型与血脂、血糖和心脏超声诊断结果等临床指标的关系，为中医辨证客观化提供临床证据。方法 共纳入300例冠心病合并2型糖尿病患者，观察并比较不同证型患者的血糖［空腹血糖（fasting plasma glucose, FPG）、餐后2 h血糖（2-hour postprandial blood glucose, 2hPG）、糖基化血红蛋白A1c（glycosylated hemoglobin, HbA1c）］、血脂［三酰甘油（triglyceride, TG）、总胆固醇（total cholesterol, TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol, LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C）］、血同型半胱氨酸（homocysteine, HCY）、血C-反应蛋白（C-reactive protein, CRP）及心脏超声诊断结果［（左室内径（left ventricular diameter, LVD）、左室射血分数（left ventricular ejection fraction, LVEF）］。结果 不同证型的冠心病合并2型糖尿病患者FPG、HbA1c比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；阳虚血瘀证患者TC、TG水平最高，而气虚痰阻证患者LDL-C最高；不同证型患者2hPG、HDL-C、CRP水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。气阴两虚证、气虚痰瘀证、阳虚血瘀证患者HCY、LVD水平依次递增，而LVEF依次递减。结论 不同证型冠心病合并2型糖尿病患者血糖、血脂和心脏超声结果等临床指标存在一定差异。     

西尼罗病毒E蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

利用PCR技术扩增西尼罗病毒(WNV)E蛋白基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-WNV-E,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导目的蛋白表达,对诱导条件进行优化,利用His镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,纯化后的蛋白经SDS-PAGE与Westernblot鉴定正确后,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体并进行间接免疫荧光鉴定。结果显示:WNV E蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式被成功表达,蛋白最佳诱导条件为37℃,0.8 mmol/L IPTG诱导5 h,经间接免疫荧光鉴定多克隆抗体能特异性识别WNV E蛋白。本研究成功表达并纯化了WNV E蛋白,证明该蛋白具有良好的免疫原性,为WNV抗原、抗体检测方法的建立和新型疫苗的研发及相关研究奠定了基础。     

非洲猪瘟TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的快速诊断方法,本研究根据ASFV SY18株p17蛋白的编码基因D117L的保守序列设计并合成引物和探针,建立了基于ASFV p17蛋白的编码基因D117L的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法的C_t值与标准品在1×10^9~1×10^1copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.192,检测下限为10 copies/μL,且与其他能引起相似症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于1.920 7%,重复性好。此方法可用于ASF的早期诊断和ASFV快速检测。     

The use of serum protein analysis in the diagnosis of fatal envenomation via Crotalus horridus (timber rattlesnake)

Deaths occurring due to rattlesnake envenomization are extremely rare and must be thoroughly investigated in the same manner as any other type of death. Our research presents the case of an adult white male who suffered a fatal timber rattlesnake (Crotalus horridus) envenomation in northwest Florida in 2018. Blood samples were taken from the decedent's heart and vasculature of the chest and sent for serum proteomic analysis. Serum proteomic analysis was utilized in order to identify proteins from timber rattlesnake (C. horridus) found within the victim's blood. The confirmation of the presence of timber rattlesnake venom within the victim's blood allows the forensic pathologist to determine the cause of death most accurately and likewise, assists with the manner of death determination. Blood samples were separated into two groups: one with the abundant endogenous proteins depleted to facilitate detection of lower abundant proteins and one undepleted. In the depleted sample, a total of 712 proteins were identified, with 47 of the proteins (6.6%) occurring originating from timber rattlesnake (C. horridus). Likewise, a total of 742 proteins were identified in the undepleted sample, with 52 of the proteins (7.0%) occurring in timber rattlesnake (C. horridus). No timber rattlesnake (C. horridus) proteins were found in control human serum.     

IMA和H-FABP在心源性猝死法医学诊断中的应用

急性心肌缺血的发生是心源性猝死的最常见原因,而如何认定早期急性心肌缺血是法医学研究的热点,同时也是临床预防心肌梗死发生的重要环节。本文通过对缺血修饰白蛋白(ischemia modified albumin,IMA)和心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid binding protein,H-FABP)的结构、功能、临床应用价值及法医学中的应用前景进行综述,旨在分析二者是否可作为早期心肌缺血的生化检测指标用于心源性猝死的诊断,并为今后选择心源性猝死的科研方向提供借鉴。     

小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PRRV)抗体的方法,对具有小反刍兽疫病毒特异性的N蛋白第Ⅳ区域进行扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用于小反刍兽疫病毒N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中抗小反刍兽疫病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释倍数、血清孵育时间等反应条件进行了优化。Western-blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的反应原性。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的小反刍兽疫病毒抗体和牛瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达98.4%。证实,本研究建立的检测血清中抗PPRV抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组质粒pEGFP-NSP9的构建与表达

为验证siRNAs对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制效果,构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因与增强型绿色荧光蛋白基因GFP的融合表达质粒,并在Marc145细胞中进行了表达。通过RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因,将其克隆入表达载体pEGFP-N1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染Marc145细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和NSP9基因转录水平。结果显示,经双酶切及PCR鉴定,目的基因的大小与预期相符。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有NSP9基因的转录。本研究成功构建的猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因GFP融合表达质粒,为在细胞水平快速筛选有效的siRNAs提供了工具。     

大鼠博落回总碱中毒后心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达

目的 观察大鼠博落回总碱中毒后不同时间段心肌细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达情况,为博落回中毒鉴定提供分子生物学标志物. 方法 制作大鼠博落回总碱中毒实验模型,通过免疫组化染色检测技术,观测不同时间段大鼠心肌细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达情况,并对其结果 进行图像分析. 结果 博落回总碱中毒后不同时间段心肌细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达不同,高于正常对照组(P<0.05).结论 博落回总碱中毒症状不明显情况下,应用免疫组织化学技术检测Bcl-2和Bax蛋白表达,可作为鉴定博落回总碱中毒的辅助手段.